摘要： 來自重慶醫(yī)科大學的研究人員成功建立了胃癌細胞SGC7901中高爾基體的蛋白質組學技術路線，為胃癌細胞內高爾基體功能的深入研究奠定了基礎。這一研究成果公布在《中國生物工程雜志》上。

        報道：來自重慶醫(yī)科大學的研究人員成功建立了胃癌細胞SGC7901中高爾基體的蛋白質組學技術路線，為胃癌細胞內高爾基體功能的深入研究奠定了基礎。這一研究成果公布在《中國生物工程雜志》上。

        高爾基體功能復雜，除了參與蛋白加工外，研究表明，高爾基體還能參與細胞分化及細胞間信號傳導，并在凋亡中扮演重要角色，其功能障礙也許和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有某種。根據(jù)人類基因組研究，人類高爾基體約一千多種蛋白質中僅有五、六百種得到了鑒定，如能建立一條關于高爾基體蛋白質組成的技術路線將有助于其功能的深入研究。

        蛋白質組學是一種有效的研究方法，特別隨著亞細胞器蛋白質組學技術的迅猛發(fā)展，使高爾基體的全面研究變?yōu)榭尚?。因此研究人員希望能以胃癌細胞中的高爾基體為研究對象，通過亞細胞器蛋白質組學方法，建立胃癌細胞中高爾基體的蛋白質組方法學。

        研究人員采用蔗糖密度梯度的超速離心方法分離純化高爾基體，雙向凝膠電泳（2-DE）分離高爾基體蛋白質，用ImageMaster 2D軟件分析所得圖譜，基質輔助激光解吸離子化飛行時間質譜（MALDI—TOF MS）鑒定蛋白質點等一系列亞細胞器蛋白質組學方法建立胃癌細胞內高爾基體的蛋白圖譜。

        結果顯示分離出的純度較高的高爾基體建立了分辨率和重復性均較好的雙向電泳圖譜，運用質譜技術鑒定出12個蛋白質，包括蛋白合成相關蛋白，膜融合蛋白，調節(jié)蛋白，凋亡相關蛋白，運輸?shù)鞍祝毎鲋撤只嚓P蛋白。通過亞細胞器分離純化，雙向電泳的蛋白分離及MALDI-TOF MS蛋白鑒定分析，成功建立了胃癌細胞SGC7901中高爾基體的蛋白質組學技術路線。

        亞細胞器蛋白質組學與全細胞蛋白質組學相比，可以提高低豐度蛋白的檢出，完成蛋白質的定位，此外還可提供有關蛋白質在細胞器間的轉移運輸及蛋白間的相互作用等信息。目前國內外研究較多的是線粒體的亞細胞蛋白質組，關于高爾基體蛋白質組學的報道，國外也于來源于鼠肝或其他組織的高爾基體。由于其易得性，大鼠肝臟是目前高爾基體的理想來源，通過對鼠肝高爾基體的蛋白質組學研究在發(fā)現(xiàn)新蛋白，了解鼠肝高爾基體的功能等方面已取得一定成績，但對來源于胃癌細胞內高爾基體的蛋白研究國內外均未見報道。

        亞細胞蛋白質組學的三大核心技術主要包括亞細胞器分離，雙向電泳建立及質譜分析，這一研究正是運用此思路，完成了胃癌細胞內高爾基體的亞細胞器分離，高爾基體雙向電泳建立及質譜鑒定這一套完整的亞細胞器蛋白質組學技術路線，以期能對高爾基體在胃癌細胞內功能的深入研究奠定基礎。

        高爾基體是種膜性細胞器，通過“鳥槍”蛋白組學途徑可以檢測出高爾基體上極酸極堿及疏水性蛋白，利于高爾基體蛋白的全面認識。但雙向電泳的蛋白分離，對研究胃癌細胞高爾基體來說，更加直觀，能對其在pH3－10范圍的蛋白組成及布情況有個非常清楚明了的感官認識，所以即使在對胃癌細胞高爾基體上的蛋白沒有任何了解的情況下，重復性好的2D膠也能*時間展示出蛋白組成及分布情況。從建立的高爾基體電泳圖譜中，可見蛋白點紋理邊界清晰，蛋白點基本被分離開來，此后的質譜鑒定也可看出幾乎每個蛋白點只代表了一個蛋白質，且穩(wěn)定的雙向電泳圖具有很高的匹配性和重復性。這些均說明用這一實驗方法建立的高爾基體的雙向電泳是可行的。該雙向電泳圖譜是胃癌細胞SGC7901中高爾基體蛋白質分布情況的再現(xiàn)，為我們認識高爾基體上的蛋白提供可能。

        除此之外，質譜分析等都說明了這一實驗中鑒定的這些蛋白的功能提示在胃癌細胞內它們也發(fā)揮著重要的作用，通過實驗建立的技術平臺提供了認識胃癌細胞上高爾基體蛋白成分的方法學，有利于深入研究高爾基體與胃癌間的作用。

        總的說來運用亞細胞器分離，雙向電泳及質譜技術，胃癌細胞SGC7901內高爾基體這一細胞器的亞細胞蛋白質組技術方法被成功建立。該技術平臺的建立開啟了對胃癌細胞高爾基體的蛋白組成情況的全面認識的大門，有利于高爾基體功能的深入研究。此技術路線并為胃癌細胞間及正常胃上皮細胞間高爾基體的比較蛋白質組學發(fā)展奠定基礎。