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瓊脂糖凝膠的配制
根據(jù)所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖,加入相應(yīng)電泳緩沖液中,用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖*溶解,加入適量 EB 混勻,適當(dāng)冷卻后傾入凝膠鑄槽中,插入梳子,凝膠厚度不超過(guò)梳孔,如有氣泡產(chǎn)生則用玻璃棒驅(qū)除,不能過(guò)早拔除梳子,應(yīng)待凝膠*凝結(jié)后才能拔除梳子。
3.P1、P2、P3的配制P1 的配制:在 800ml 去離子水中溶入 Tris 堿
P2 的配制:在 950ml 去離子水中溶入 NaOH
P3 的配制:在 500ml 去離子水中溶入醋酸鉀
4.常用緩沖液:
TE
pH 7.4
10mmol/LTris?Cl (pH7.4)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 7.6
10mmol/LTris?Cl (pH7.6)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 8.0
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STE(亦稱(chēng) TEN)
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
5%Triton X-100
TNT
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
150mmol/L NaCl
0.05% Tween 20
電泳緩沖液
Tris-乙酸(TAE):50×濃貯存液(每升):
5 7.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用時(shí)再稀釋50倍。
Tris-磷酸(TPE):10×濃貯存液(每升):
15.5ml 85%磷酸(
40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用時(shí)再稀釋10倍。
Tris-硼酸(TBE):5×濃貯存液(每升):
使用時(shí)再稀釋10倍。
堿性緩沖液:1×使用液(每升):5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸:5×濃貯存液(每升):
50ml 10%SDS(電泳級(jí))
2×SDS 凝膠加樣緩沖液
100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)
200mmol/L 二硫蘇糖醇(DTT)
4%SDS(電泳級(jí))
0.2%溴酚藍(lán)
20%甘油
30%丙烯酰胺:
將
水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過(guò)濾除菌查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中
保存于室溫。
10mol/L 乙酸銨:
把
1mol/LCaCl2:
在200ml純水中(Milli-Q水或相當(dāng)級(jí)別的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過(guò)濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-
2.5mol/LCaCl2:
在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過(guò)濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-
1mol/L 二硫蘇糖醇(DTT):
用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,過(guò)濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-
0.5mol/LEDTA(pH8.0):
在 800ml 水中加入
溴化乙錠(10mg/ml):
在100ml水中加入
1mol/LMgCl2:
在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至
酚:氯仿:
把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保存于
磷酸緩沖鹽溶液(PBS):
在800ml蒸餾水中溶解
乙酸鉀溶液(用于堿裂解):
在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。
3mol/L 乙酸鈉(pH5.2 和 7.0):
在800ml水中溶解
1mol/LTris:
在800ml水中溶解121.1gTris堿,加入濃HCl調(diào)節(jié)pH至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
應(yīng)使溶液冷至室溫后方可zui后調(diào)定pH值,加水定容至
Tris 緩沖鹽溶液(TBS):
在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿,加入0.015酚紅并用HCl調(diào)pH值至7.4,用蒸餾水定容至
5mmol/LNH
秤取乙酸銨
10mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)溶液:
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置
10%十二烷基硫酸鈉(SDS):
在900ml水中溶解
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