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血清分類學(xué)

更新時間:2022-01-05 瀏覽次數(shù):1204

血清分類學(xué) (Serotaxonomy) 以動物血清的免疫反應(yīng)檢定物種及其親緣關(guān)系的一個實(shí)驗(yàn)性分類學(xué)分支,也稱免疫分類學(xué)。在免疫的反應(yīng)系統(tǒng)中所用的抗原,是從要檢定的物種個體中所提取的蛋白質(zhì)或其類似的成分,把抗原按免疫學(xué)的方法注入兔或其他試驗(yàn)動物體內(nèi),使之產(chǎn)生抗體及其類似物如補(bǔ)體,經(jīng)一定時間抽取兔的血液,制成血清,稱為抗血清。由于這種血清中含有抗體,故在其中滴入原來作為抗原的蛋白質(zhì)溶液時,便能產(chǎn)生渾濁的沉淀,稱為沉淀素反應(yīng)。來源相同的蛋白質(zhì)抗體與抗血清所起的反應(yīng)稱為同素反應(yīng)。親緣關(guān)系近的生物,其相應(yīng)的蛋白質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)近似,也有此種反應(yīng),稱為交叉反應(yīng)。親緣關(guān)系愈遠(yuǎn),所產(chǎn)生的沉淀便愈少,因此,沉淀的量可作為測定親緣關(guān)系的一個指標(biāo)。


  血清反應(yīng)是R.克勞斯在1877年發(fā)現(xiàn)的,1899年J.博爾代發(fā)現(xiàn)交叉反應(yīng),1901年G.H.F.納托爾指出這種方法可應(yīng)用于生物分類。在其后十多年中,血清反應(yīng)的很多基本現(xiàn)象被查明,應(yīng)用于動物和植物的分類工作中有一定的結(jié)果。但由于抗原蛋白的制備和試驗(yàn)動物免疫狀態(tài)的不同(由生理?xiàng)l件和注射抗原蛋白次數(shù)不同所引起),在定量測定中常不能獲得可重復(fù)的結(jié)果,于是對這方法的意義有不同的看法。從30年代以后,除早期使用的點(diǎn)滴試驗(yàn)外,發(fā)展出渾濁度測定、免疫擴(kuò)散測定、電泳、微量補(bǔ)體結(jié)合等技術(shù)。


  點(diǎn)滴試驗(yàn)是在試管中先放已制備好的抗血清,將要測定的蛋白質(zhì)溶液稀釋成不同濃度,用滴管滴在抗血清上,觀察在稀釋到什么濃度仍能產(chǎn)生沉淀。比較不同物種來源的蛋白質(zhì)能產(chǎn)生反應(yīng)的濃度,可確定這些物種的親緣關(guān)系。但應(yīng)注意對定量抗體作用的抗原其濃度與所產(chǎn)生沉淀的量并非按直線的關(guān)系而變化。納托爾早在1904年用此法測試了由人血清蛋白所產(chǎn)生的抗體與其他靈長類血清蛋白的交叉反應(yīng),見到非洲猩猩的血清蛋白有最濃的沉淀反應(yīng),而狐猴的血清蛋白反應(yīng)最弱。亞洲猩猩的反應(yīng)較東半球其他猿類的反應(yīng)強(qiáng),而在東半球猿類的反應(yīng)較西半球猿類的強(qiáng)。他的試驗(yàn)初步闡明了靈長類不同種類之間的親緣關(guān)系,指出非洲猩猩與人的關(guān)系比較接近。這一結(jié)果為以后更精確的測定所證實(shí)。


  渾濁度測定是用抗原蛋白與抗血清以一定比例混和,用光度計測量所產(chǎn)生的沉淀的消光率來推算渾濁度。如果抗血清的量固定,改變抗原蛋白質(zhì)的濃度,連續(xù)測定其所產(chǎn)生的渾濁度便可制備出表示兩者關(guān)系的曲線,借曲線高低或曲線下面積的大小,即可測定不同來源的蛋白質(zhì)的物種親緣關(guān)系。


  免疫擴(kuò)散測定法是利用不同蛋白質(zhì)分子在瓊脂等凝膠中擴(kuò)散速度的不同,使抗血清與抗原中的不同部分在不同地點(diǎn)相遇而產(chǎn)生多次沉淀反應(yīng)。由此測定抗原蛋白質(zhì)的種類和相似性。如果把要測定的蛋白質(zhì)用凝膠電泳分成幾個部分,然后在凝膠介質(zhì)中已分開的蛋白質(zhì)一定距離處挖一平行的凹槽,其中放抗血清,使發(fā)生擴(kuò)散作用,抗體與抗原起沉淀反應(yīng),則免疫反應(yīng)更為靈敏和具特異性。如果制備電泳凝膠板時在溶液中加入一定量的抗血清,凝膠凝結(jié)后在板靠陰極一端挖一排小孔,孔中加入不同來源的蛋白質(zhì),進(jìn)行電泳時這些蛋白質(zhì)向陽極泳動,因凝膠板中含有抗體,使抗原蛋白質(zhì)所形成復(fù)合物的沉淀線形成尖峰,形似火箭,故稱火箭電泳。峰高度與被測蛋白質(zhì)的免疫特異性和含量成比例,故可做定量測定。


  在60年代,美國M.古德曼等以免疫擴(kuò)散測定法測定了20多種靈長類動物以及樹鼩等的親緣關(guān)系,見到跗猴與類人猿亞目的種類有稍相接近的親緣關(guān)系,懶猴類與狐猴類有稍相接近的親緣關(guān)系。靈長類種類之間的親緣關(guān)系要比與樹鼩的更為接近。在懶猴中,見到亞洲懶猴與非洲樹熊猴并不接近,而是比非洲嬰猴離得更遠(yuǎn)。以免疫擴(kuò)散測定法所建立的懶猴的系統(tǒng)樹把懶猴分為懶猴科(Lorisidae)、樹熊猴科(Perodictidae)和嬰猴科(Galagi-dae)。此外還結(jié)合形態(tài)觀察認(rèn)為倭狐猴(Microcebus)和鼠狐猴(Cheirogaleus)不應(yīng)屬于狐猴科(Lemuridae),而是懶猴科的分支。樹鼩(Tupaia)與鼯猴(Cynocephalus)的親緣關(guān)系與對靈長類一樣疏遠(yuǎn),但與其他哺乳動物相比則稍為接近。


  補(bǔ)體結(jié)合測定是利用高等動物血漿在免疫時產(chǎn)生的一類稱為補(bǔ)體的蛋白質(zhì),這種補(bǔ)體有與起反應(yīng)的抗原抗體相結(jié)合的特點(diǎn),并能使敏化的紅細(xì)胞破裂,產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。在試驗(yàn)條件下當(dāng)有稍為過量的補(bǔ)體加入有特異反應(yīng)的抗原抗體溶液中時,一部分補(bǔ)體便被結(jié)合,免疫系統(tǒng)的特異性愈大,被結(jié)合的補(bǔ)體便愈多,溶液中所剩下的游離補(bǔ)體便愈少。經(jīng)一定的反應(yīng)時間后,再加入敏化的紅細(xì)胞,游離補(bǔ)體使紅細(xì)胞破裂產(chǎn)生溶血現(xiàn)象,未破裂的紅細(xì)胞可用離心法除去。游離補(bǔ)體的量可用光度計對混合液中血紅蛋白光密度的大小來測定。補(bǔ)體在抗原抗體反應(yīng)中被結(jié)合的程度與血紅蛋白的密度成反比,在交叉反應(yīng)中可作為要測定蛋白質(zhì)的同系抗原抗體蛋白質(zhì)差異的指標(biāo)。在60年代初發(fā)展了微量補(bǔ)體結(jié)合測定,反應(yīng)靈敏度高,需用的抗原蛋白質(zhì)的量少,60和70年代美國V.W.薩維奇、A.C.威爾遜等應(yīng)用此法再次研究了靈長類某些種類的親緣關(guān)系,證實(shí)非洲的大猩猩和黑猩猩與人的親緣關(guān)系比亞洲的猩猩、長臂猿、合趾猿的更為接近。此外,對以前測得的靈長類在分枝發(fā)展起始的系統(tǒng)關(guān)系提出修正意見。


  血清的免疫反應(yīng)可在蛋白質(zhì)的分子水平上用來定量測定物種的親緣關(guān)系,對研究生物的系統(tǒng)發(fā)育非常有用。但所顯示的關(guān)系對不同生物類群的意義可能并非*相同,所以應(yīng)與其他的分類學(xué)方法所得結(jié)果相互補(bǔ)充。

 

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