ELISA實驗做了很多次，可是結(jié)果還是有偏差？可能很多同學(xué)都會出現(xiàn)這樣的問題，那么問題到底出在哪呢，今天小編就來給大家總結(jié)一下，ELISA實驗中會經(jīng)常遇見的問題。

一、ELISA簡介
酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱 ELISA）是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。

二、ELISA的應(yīng)用
1.免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
2.研究抗酶抗體的合成。
3.顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
4.定量檢測體液中抗原或抗體成份。

三、ELISA實驗疑難問題解答

1.非正常的樣本值

①不正確的收集或保存
解決方案：確保正確的底物體積混合。如果底物是凍干粉，用相應(yīng)緩沖液重懸*，充分混合并在一定時間內(nèi)使用。
②不正確的樣本制備
說明書中樣本制備方法已經(jīng)過性能測試驗證，嚴(yán)格按照說明書推薦進(jìn)行。確保使用正確的校正稀釋液。

2.信號強度增長不充分

①底物準(zhǔn)備有誤
解決方案：確保正確的底物體積并混合。如果底物是凍干粉，用相應(yīng)緩沖液重懸*，充分混合并在一定時間內(nèi)使用。
②每孔底物添加體積有誤
解決方案：保證移液器正常工作，必要時進(jìn)行重新校正。保證移液器吸頭連接緊密。
③孵育時間或溫度有誤
解決方案：嚴(yán)格按照推薦的孵育時間和溫度進(jìn)行實驗，避免在環(huán)境條件變化的位置孵育96孔板（如放在通風(fēng)處或窗臺邊）。
④偶聯(lián)物或底物準(zhǔn)備有誤
解決方案：確?；旌舷嗤w積的偶聯(lián)物和底物。加入后會立即顯色。底物在使用前應(yīng)避光保存。
⑤儀器設(shè)置不正確
解決方案：確保酶標(biāo)儀使用了正確的濾光片，確保按照說明書，正確的配置儀器參數(shù)。

3.邊緣效應(yīng)

①工作臺溫度不均衡
解決方案：避免在環(huán)境條件變化的位置孵育，如放在通風(fēng)處或窗臺邊。
②體系液體蒸發(fā)
解決方案：保證移液器正常工作，必要時進(jìn)行重新校正。保證移液器吸頭連接緊密。
③疊板
孵育時避免疊板。

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