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13817140470更新時間:2020-09-17 瀏覽次數(shù):3128
人需要消化,細胞也是需要消化的,那細胞消化的方法你知道幾種?和小編一起來看看吧!
一、離子螯合劑:不破壞細胞表面分子,僅與CAMs螯合,因此,如果檢測細胞表面分子的話,盡量,甚至是一定不要用酶消化法。
1、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質(zhì),對細胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細胞要洗一遍。
2、商品化的無酶消化液。個人的使用經(jīng)常覺得對細胞的損傷比較大,但是分離成單細胞懸液的能力確實比較強。
二、物理法:直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。
三、冷凍法:
此方法僅能用于細胞傳代時。無法使組織上的細胞脫落下來。本方法的原理,是因細胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。
優(yōu)點:對細胞損傷小,不需要中止或洗細胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細胞。不足是細胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導致大量細胞死亡操作的間充質(zhì)干細胞、DC細胞的培養(yǎng),效果非常滿意。
具體過程是:
1.用較多的4度的PBS洗滌一遍細胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔)。
2.再加0.5ml 4度的PBS,靜置操作臺上,很快細胞就小片脫落。
3.輕輕吹打,細胞即*脫落。
4.按一定比例傳代。
四、酶消化法。
1、胰酶。這是用得zui多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。
2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下細胞。這種方法作用溫和,對細胞損傷較小,但是,價格也較貴。
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