ELISA實(shí)驗(yàn)常見的幾大結(jié)果問題有標(biāo)準(zhǔn)曲線較差、無信號、變異系數(shù)（CV）較大等，那么實(shí)質(zhì)導(dǎo)致的原因呢有多方面，具體的情況如下：

?標(biāo)準(zhǔn)曲線較差

原因一：標(biāo)準(zhǔn)品溶液配置有誤
解決方案：確認(rèn)是否進(jìn)行正確稀釋。

原因二：標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不當(dāng)
解決方案：開蓋前進(jìn)行離心；檢查復(fù)溶后是否存在不溶物。

原因三：標(biāo)準(zhǔn)品已降解
解決方案：按推薦方式保存和處理標(biāo)準(zhǔn)品。

原因四：曲線的標(biāo)度不適合
解決方案：嘗試使用不同標(biāo)度繪制曲線，例如雙對數(shù)、5 參數(shù)擬合。

原因五：移液器加樣誤差
解決方案：正確使用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器

無信號

原因一：孵育時(shí)間過短
解決方案：樣品在 4 ℃ 孵育過夜，或遵循試劑的實(shí)驗(yàn)方案。

原因二：靶標(biāo)含量低于檢測范圍
解決方案：減小樣品的稀釋倍數(shù)或濃縮樣品。

原因三：樣品類型不適用
解決方案：對于沒有驗(yàn)證過的樣品類型，檢測信號可能減弱或沒有使用驗(yàn)證過的樣品類型作為陽性對照同時(shí)進(jìn)行檢測。

原因四：抗原表位被孔板吸附，無法識別
解決方案：使用直接或間接 ELISA 方法增強(qiáng)檢測肽的能力，將肽偶聯(lián)到大的載體蛋白上，然后包被到微量滴定板。

原因五：檢測緩沖液的相容性
解決方案：確保檢測緩沖液與靶標(biāo)兼容（例如，保留酶活性、保留蛋白質(zhì)相互作用）。

原因六：檢測試劑不足
解決方案：遵循試劑的實(shí)驗(yàn)方案，增加檢測試劑的濃度或用量。

原因七：樣品制備不正確
解決方案：確保進(jìn)行正確的樣品制備/稀釋。樣品可能與微量滴定板測定形式不兼容。

原因七：抗體不足
解決方案：嘗試不同的抗體濃度/稀釋。

原因八：孵育溫度過低
解決方案：確保在正確溫度下進(jìn)行孵育。所有試劑（包括孔板）在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前應(yīng)處于室溫，或試劑的實(shí)驗(yàn)方案所建議的溫度。

原因九：波長不正確
解決方案：確認(rèn)波長，再次讀板。

原因十：孔板被強(qiáng)力洗滌
解決方案：檢查并確保自動洗滌系統(tǒng)的壓力正確。如果手動洗滌，則輕輕吸取沖洗緩沖液。

原因十一：孔變干
解決方案：測定開始后，不要讓孔變干。將所有的孵育步驟使用封口膜或膠帶密封孔板。

原因十二：酶反應(yīng)的顯色速度慢
使用前配制底物溶液。確保母液未過期、未污染。延長孵育時(shí)間。

變異系數(shù)（CV）較大 

原因一：孔中有氣泡
解決方案讀板前，確保不存在氣泡。

原因二：孔洗滌不均/未充分洗滌
解決方案：檢查洗板機(jī)的所有管口是否暢通。使用推薦方法進(jìn)行洗滌。

原因三：試劑混勻不充分
解決方案：確保所有試劑充分混勻。

原因四：移液量不一致
解決方案：正確使用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器。

原因五：邊緣效應(yīng)
解決方案：確保孔板和所有試劑處于室溫。

原因六：樣品制備或保存條件不一致
解決方案：確保樣品制備保持一致，使用*的樣品保存條件（例如盡可能減少反復(fù)凍融）。

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