ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。
今天上海勁馬BIM試劑盒小課堂為您詳解新手需要了解的ELISA的實(shí)驗(yàn)步驟: 
1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓 實(shí)自封條，密封口袋，放回4℃。
2．空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液，其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔)，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育90分鐘。 
3．提前20分鐘準(zhǔn)備生物素化抗體工作液。 
4．洗板5次。 
5．空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育60分鐘。 
6．提前20分鐘準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。 
7．洗板5次。 
8．空白孔加酶結(jié)合物稀釋液，其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱，避光孵育30分鐘。 
9．打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。 
10．洗板5次。 
11．加入顯色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分鐘。 
12．加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內(nèi))。在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果。 
13．實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束。 
勁馬建議保存酶標(biāo)板框，以備下次或者今后試驗(yàn)使用。
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