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關(guān)于酶點(diǎn)（ELISPOT）技術(shù)的相關(guān)知識(shí)
更新時(shí)間：2009-11-16 瀏覽次數(shù)：2814
酶點(diǎn)（ELISPOT）技術(shù)是zui近幾年發(fā)展起來(lái)應(yīng)用于抗病毒免疫和抗腫瘤免疫的一種新型測(cè)定方法。
Sanquin 提供的顆粒酶-B酶點(diǎn)檢測(cè)試劑盒應(yīng)用技術(shù)，靈敏度高，僅一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞即可測(cè)到存在的顆粒酶-B。特異性強(qiáng)，結(jié)果重復(fù)性好。為抗病毒和抗腫瘤研究提供新型強(qiáng)有力的檢測(cè)工具。
酶點(diǎn)技術(shù)與酶標(biāo)技術(shù)比較
1、酶點(diǎn)技術(shù)明顯的特點(diǎn)是靈敏度增加
2、酶點(diǎn)技術(shù)僅需要1 個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞 / 孔即可,靈敏度達(dá)到1 :1,000,000的陽(yáng)性準(zhǔn)確分析
3、酶標(biāo)技術(shù)需要至少要有400 細(xì)胞 / 孔才可達(dá)到有意義的檢測(cè)水平
4、能在單細(xì)胞水平上分析產(chǎn)生細(xì)胞因子的T細(xì)胞
顆粒酶-B介紹
顆粒酶是外切絲氨酸蛋白酶，來(lái)自細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTLs）和自然殺傷細(xì)胞（NK）釋放的細(xì)胞漿顆粒。這些顆粒含有顆粒酶原及其它蛋白酶原，包括穿孔蛋白。由于CTL細(xì)胞與靶細(xì)胞結(jié)合（經(jīng)CTL受體和靶細(xì)胞表面的抗原肽-MHCⅠ類(lèi)分子復(fù)合物結(jié)合），通過(guò)顆粒的胞吐過(guò)程，顆粒酶進(jìn)入了靶細(xì)胞，穿孔蛋白在細(xì)胞膜聚合而進(jìn)入靶細(xì)胞形成跨膜的小孔，使靶細(xì)胞膜穿孔。穿孔蛋白通過(guò)使粒酶-內(nèi)體膜穿孔釋放出粒酶。顆粒酶B激活了細(xì)胞內(nèi)caspases反應(yīng), zui后引起靶細(xì)胞的死亡. 顆粒酶A也能誘發(fā)靶細(xì)胞的凋亡。
在許多疾病中，用流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞可測(cè)定顆粒酶B陽(yáng)性的CTL百分比。 部分顆粒酶也可 “漏”入外周血液和其它體液。 在健康者體內(nèi)也可測(cè)得顆粒酶。.這些可溶性的顆粒酶可以用ELISA測(cè)定。
PeliSPOT人顆粒酶 B 試劑盒用于重復(fù)性 特異性定量測(cè)定人CTL細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌釋放的顆粒酶B頻數(shù)。
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