中文名稱：考馬斯亮藍(lán)

英文名稱：Coomassie brilliant blue

定義：屬于三苯甲烷類染料，可與蛋白質(zhì)形成較強(qiáng)的非共價(jià)復(fù)合體。考馬斯亮藍(lán)R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質(zhì)條帶的染色；考馬斯亮藍(lán)G250是布拉德福德（Bradford）蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分。

應(yīng)用學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；方法與技術(shù)（二級(jí)學(xué)科）

考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量

該方法用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的定量是比較的，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2%影響測定結(jié)果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于細(xì)胞骨架的檢驗(yàn)。

1．Bradford濃染液的配制：

將100mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL濃磷酸，然后，用蒸餾水補(bǔ)充至200mL，此染液放4℃至少6個(gè)月保持穩(wěn)定。

2．標(biāo)準(zhǔn)曲線蛋白質(zhì)樣本的準(zhǔn)備：

盡量使用與待測樣本性質(zhì)相近的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標(biāo)準(zhǔn)。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3．溶解：

將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的緩沖溶液相同（用PBS）。

4．稀釋：

按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結(jié)合溶液，如出現(xiàn)沉淀，過濾除去。

5．作用：

每個(gè)樣本加5mL

稀釋的染料結(jié)合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質(zhì)結(jié)合后，將由紅色變?yōu)樗{(lán)色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應(yīng)不得超過30min．

6．計(jì)算：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測樣本的濃度。

考馬斯亮藍(lán)處理方法

考馬斯亮藍(lán)和皮膚中蛋白質(zhì)通過范德華力結(jié)合，反應(yīng)快速，并且穩(wěn)定，無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右，皮屑細(xì)胞自然衰老脫落即可無礙。