ELISA實(shí)驗(yàn)中正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的第一步，下面就和大家簡(jiǎn)單介紹在ELISA實(shí)驗(yàn)中對(duì)不同類型樣本的處理方法！
 

　　1、 血清
 

　　血清是常用于ELISA檢測(cè)的一類樣本，處理比較簡(jiǎn)單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一晚上，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清大程度的析出)。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
 

　　采血過程中應(yīng)避免溶血，因紅細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，從而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性，同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。
 

　　2、 血漿
 

　　ELISA實(shí)驗(yàn)用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融，避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
 

　　3、 細(xì)胞培養(yǎng)上清
 

　　取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。)
 

　　4、 細(xì)胞裂解液
 

　　(1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用yi酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。(懸浮細(xì)胞可省略)
 

　　(2)收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
 

　　(3)加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
 

　　(4)將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。
 

　　(5)4℃10000×g離心10min，除去細(xì)胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。)
 

　　5、組織勻漿液
 

　　(1)將組織樣本用PBS 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
 

　　(2)將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊小，便于勻漿得充分。
 

　　(3)將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，檢測(cè)后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
 

　　(4)吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5-10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
 

　　6、 尿液、唾液等其他液體生物樣本
 

　　1000×g離心20min，取上清即可檢測(cè)。
 

　　小結(jié)：
 

　　ELISA只能檢測(cè)可溶性蛋白的含量，故應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本盡量在1~6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。(保證樣本不含NaN3，NaN3會(huì)抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。)