一、預(yù)防污染

預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有在細(xì)胞培養(yǎng)前做好預(yù)防工作，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。

一般預(yù)防可以從以下幾方面著手：

1. 作者

① 操作者需要具備很強的責(zé)任心，并且細(xì)心穩(wěn)重、操作技術(shù)熟練。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿隔離衣。進入后關(guān)好門，坐下后盡量少走動。工作開始前用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口，嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，以免造成大批污染。

② 操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼。（操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面）

③ 操作時要常更換吸管，切勿一直使用同一根吸管。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)及時丟棄。實驗完畢后及時收拾，保持實驗室的清潔整齊，最后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。

2. 物品、用品消毒滅菌

細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要che底，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。

3. 防止細(xì)胞交叉污染

① 在進行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，做上標(biāo)記便于辨別。并按順序進行操作，避免一起進行時發(fā)生混亂。

② 在進行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。

③ 所有細(xì)胞一旦購置，或從別處引入、自己建立，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇，重新培養(yǎng)。

二、污染的清除

培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)都會較難處理。如果污染細(xì)胞價值不大，建議丟棄；有細(xì)胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除：

1. 使用抗生素

抗生素對殺滅細(xì)菌的效果較好。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好；預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青-霉素、鏈-霉素外，還可用慶-大霉素、卡-那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制-霉菌素等。常用400～800μg/mL卡-那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進行治療。

2. 使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個月后仍為陰性。（此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟）

3. 加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體，但對細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進行預(yù)試驗，摸索能最大限度殺死支原體又對細(xì)胞影響最小的加熱時間。（此法有時不可靠，若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。）

4. 其他方法

除了上述去除污染的方法外，還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿-嘧啶再用光照射的方法及過濾法等，但均較麻煩，且效果不確定。所以一旦支原體污染，除非有特別重要價值，一般均棄之重新培養(yǎng)。

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