無(wú)外泌體血清是一種可由多種細(xì)胞分泌的直徑為30-150nm的膜性小囊泡。經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn)，其內(nèi)含有獨(dú)-特的蛋白質(zhì)與核酸分子，所含成份與其細(xì)胞來(lái)源密切相關(guān)，這也決定了無(wú)外泌體血清的功能特異性，如抗原提呈、信號(hào)傳導(dǎo)或誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、細(xì)胞間通信、腫瘤轉(zhuǎn)移等。目前，無(wú)外泌體血清研究已經(jīng)成為臨床診斷與基礎(chǔ)醫(yī)生的新熱點(diǎn)。

以外泌體為代表的細(xì)胞外囊泡是近幾年研究的熱點(diǎn)，目前的外泌體研究主要通過(guò)研究體外培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的外泌體，分析其在體內(nèi)外的功能作用。一般的血清FBS中含有供體細(xì)胞自然分泌的大量Exosomes，而用于Exosome研究的細(xì)胞必須提前更換無(wú)外泌體的血清進(jìn)行培養(yǎng)，以減少對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的污染。

目前市面上存在著商業(yè)化的無(wú)外泌體血清，然而由于其價(jià)格較高等因素，很多研究者選擇自己制備無(wú)外泌體血清，而常用的主要是基于超速離心的無(wú)外泌體血清分離方法。

一、無(wú)外泌體血清產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、內(nèi)毒素含量低，三次納米級(jí)過(guò)濾

2、嚴(yán)格控制批次差異

3、來(lái)源可靠、可溯源

4、每個(gè)批次提供相應(yīng)檢驗(yàn)檢疫報(bào)告

5、適合各種特殊細(xì)胞培養(yǎng)

6、干冰運(yùn)輸，建議存儲(chǔ)溫度為-20℃至-10℃

二、無(wú)外泌體血清制備步驟：

1. 根據(jù)需要處理的血清體積選擇合適的轉(zhuǎn)子與超離管。

2. 在超凈工作臺(tái)，將普通血清置于超離管中，配平后，進(jìn)行熱封口。

3. 將封口后的超離管放于離心機(jī)轉(zhuǎn)子中，并加入相應(yīng)適配器然后擰緊轉(zhuǎn)頭蓋。

4. 設(shè)置離心程序：4℃，120,000 ×g，離心18小時(shí)（也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時(shí)）。

5. 離心結(jié)束后，回收上清液，為避免污染，在超凈工作臺(tái)操作。

6. 收集得到無(wú)外泌體血清，并儲(chǔ)存于-20℃中備用。

三、無(wú)外泌體血清的這些注意事項(xiàng)請(qǐng)注意了：

1. 離心后，血清外泌體會(huì)富集在管底和管壁；

2. 吸取血清時(shí)，只吸取澄清部分的血清，并且遠(yuǎn)離上圖中標(biāo)記的區(qū)域；

3. 吸取70-80%的澄清的血清；

4. 其余的渾濁血清留作正常細(xì)胞的的營(yíng)養(yǎng)物添加使用，避免浪費(fèi)。

5. 如果覺得純度不夠，再把離心后收集的血清做二次超速離心。

6. 針對(duì)超速離心后的血清，必須進(jìn)行粒徑檢測(cè)（離心前樣品和離心后樣品），該數(shù)據(jù)可以放到文章補(bǔ)充材料中，用來(lái)證明無(wú)血清外泌體制備成功。