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13817140470更新時(shí)間:2022-09-20 瀏覽次數(shù):791
ELISA法評(píng)價(jià)腸道免疫功能
ELISA 法評(píng)價(jià)腸道免疫功能是通過(guò)檢測(cè)不同炎癥蛋白如急性期炎癥蛋白 MPO,血清淀粉樣蛋白 SAA 或細(xì)胞因子如 IL-6,IL-1b 等的表達(dá)水平。
器材:
組織勻漿器、酶標(biāo)板、酶標(biāo)儀。
試劑:
① 組織裂解液(200 mmol/L NaCl,5 mmol/L EDTA,10 mmol/L Tris,10% glycine,1 mmol/L PMSF,1 mg/ml Leupeptide,28 mg/ml aprotinin;pH7.4);
② PBS 緩沖液;
③ BCA 蛋白濃度檢測(cè)試劑。
④ ELISA 試劑盒
步驟
ELISA 法評(píng)價(jià)腸道免疫功能的基本過(guò)程可分為如下幾步,以檢測(cè)急性期炎癥蛋白 MPO 為例:
A 取出目的腸道組織,在冰冷的 PBS 中縱向剪開(kāi),小心洗去腔內(nèi)的消化液,在平板紙上吸去多余液體。
B 10 ml 圓底離心管中加入 1~2 ml 組織裂解液和漂洗后的腸組織,在冰浴狀態(tài)下勻漿 30 秒。
C 冰上孵育 10 分鐘,全部轉(zhuǎn)移 1.5 ml EP 管中,4 ℃ 離心 15 分鐘,轉(zhuǎn)速 12000 r/min。
D 小心分離上清,使用 BCA 法測(cè)定蛋白濃度。
E 測(cè)定濃度后的上清分裝后 - 80℃ 保存或冰上等待,立刻用于 ELISA 檢測(cè)。
F 根據(jù) ELISA 試劑盒配備的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行 MPO 的水平檢測(cè)。如下圖所示
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