在ELSIA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育。ELSIA試劑盒操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELSIA試劑盒，標準曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中間較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

　　ELSIA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELSIA試劑盒反應總是需要一定時間的溫育。

　　溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELSIA試劑盒方法作反應動力學研究時，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時，產物的可達。為加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以形成的沉淀。但因所需時間太長，在ELSIA試劑盒中一般不予采用。

　　保溫的方式除有的ELSIA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴，可將ELSIA試劑盒板置于水浴箱中，ELSIA試劑盒板底應貼著水面，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELSIA試劑盒板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，將ELSIA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如此。為避免酶標板底部受水汽或磨損導致的讀數(shù)誤差，一般采用鼓風恒溫箱保溫，這個過程必須在酶標板上方貼封紙，以免蒸發(fā)。無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時，ELSIA試劑盒板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證時間，一個人一次不宜多于兩塊板同時操作、測定。